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凝集素芯片应用集锦
时间:2019-01-11 14:46:38

凝集素芯片

凝集素(lectin)是自然界广泛存在具有识别和结合特定糖链的蛋白质,被广泛应用于糖基化修饰研究。BCBIO-LectinArray芯片点制固定56种经典凝集素,覆盖识别响应绝大部分糖链结构,是研究动物、植物、细菌、真菌细胞或蛋白高通量检测糖基化修饰的高效工具。

广州博翀生物凝集素芯片介绍:

 



     凝集素芯片应用方案分享:

 

实体瘤等疾病组织临床样本糖基化标志物发现与验证

 

实验阶段

实验内容

实验说明

第一阶段:

糖基化标志物筛选

蛋白准备与标记

对疾病组织样本和健康对照样本进行抽提蛋白定量,并生物素或荧光标记。

Lectin芯片

检测糖基化差异

将标记后的疾病组和健康组蛋白与LectinArray芯片进行孵育检测,并分析疾病组和健康对照的糖基化差异,获得候选凝集素差异列表。

第二阶段:

糖基化标志物验证

标志物蛋白

糖基化差异验证

准备大样本进行蛋白抽提;选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。

 

参考文献:

Li, Y. et al., Detection and verification of glycosylation patterns of glycoproteins from clinical specimens using lectin microarrays and lectin-based immunosorbent assays. Anal Chem 83, 8509-8516, doi:10.1021/ac201452f (2011).

 



血清临床样本糖基化标志物发现与验证

 

实验阶段

实验内容

实验说明

第一阶段:

糖基化差异筛选

蛋白准备与标记

血清疾病样本和健康对照样本,进行蛋白定量,并生物素标记。

LectinArray检测糖基化差异

生物素标记的疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,然后用荧光素标记的链霉亲和素进行检测,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。

第二阶段:

标志物糖基化验证

大样本糖基化差异验证

选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。

 

参考文献:

Zhong, Y, et al., "Serum Glycopatterns as Novel Potential Biomarkers for Diagnosis of Acute-on-Chronic Hepatitis B Liver Failure." Sci Rep 7(2017):45957.

 


 

细胞膜差异糖基化发现与验证

 

实验阶段

实验内容

实验说明

第一阶段:

细胞糖基化差异发现

细胞准备与标记

不同类型的细胞株(癌细胞株),或相同细胞实验组处理(如不同培养条件,药物或病原菌刺激等),3组实验重复, 进行荧光素标记。

LectinArray检测糖基化差异

荧光素标记的不同细胞株或实验组细胞孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。

第二阶段:

细胞差异糖基化验证

细胞差异糖基化进行凝集素标记与FACS验证

使用差异糖基化的Lectin3-5个)进行荧光素标记,然后对不同细胞系或实验组细胞进行标记,使用流式细胞仪进行细胞群定量检测。

 

参考文献:

Tao, S, et al., Lectin microarrays identify cell-specific and functionally significant cell surface glycan markers. Glycobiology 18.10(2008):761-769.

Zhou, S, et al., Lectin RCA-I specifically binds to metastasis-associated cell surface glycans in triple-negative breast cancer. Breast Cancer Research Bcr 17.1(2015):1-14.

Lynch, K, et al., Regulating Immunogenicity and Tolerogenicity of Bone Marrow-Derived Dendritic Cells through Modulation of Cell Surface Glycosylation by Dexamethasone Treatment. Frontiers in Immunology 8(2017).

Xin, A, et al., Comparative analysis of human sperm glycocalyx from different freezability ejaculates by lectin microarray and identification of ABA as sperm freezability biomarker.  Clinical Proteomics 15.1(2018):19.

 



抗体药质控差异糖基化发现与验证

 

实验阶段

实验内容

实验说明

第一阶段:抗体药糖基化差异发现

抗体药准备与标记

不同药效,或不同批次类型的抗体药进行荧光素标记。

LectinArray检测糖基化差异

荧光素标记的抗体药孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。

第二阶段:

细胞差异糖基化验证

抗体药差异糖基化使用凝集素ELISA验证

使用差异糖基化的lectin试剂盒,进行精确定量检测。

 

参考文献:

Zhang, Lei, et al., "The use of lectin microarray for assessing glycosylation of therapeutic proteins." Mabs 8.3(2016):524-535.

 



自身抗体糖基化差异研究

 

实验阶段

实验内容

实验说明

第一阶段:

自身抗体糖基化差异研究

样本准备

血清疾病样本和健康对照样本,进行IgG纯化

LectinArray检测糖基化差异

疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。

第二阶段:

差异糖基化验证

大样本糖基化差异验证

选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本验证

 

参考文献:

Yuan S, et al., Changes in Anti-Thyroglobulin IgG Glycosylation Patterns in Hashimoto's Thyroiditis Patients. [J]. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2015, 100(2):717-724.

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