肿瘤来源的自身抗体作为肺恶性结节外周生物标志物的意义

在临床工作中，经常有患者在CT检查中发现肺部有结节，但是无法准确判定是良性还是恶性。需要长期的影像学检查来判断结节的良恶性，若两年内的复查随访结节稳定，基本上可以确定为良性结节。目前需要有效的生物标志物来准确检测恶性结节。

近期，A.McGarry Houghton教授团队采用HuProt蛋白芯片对10例肺肿瘤B细胞的自身抗体进行特异性鉴定，并在250例结节患者中进一步验证，结果证明4种自体抗体结合在一起可有效预测恶性结节。相关研究结果于2018年11月在《Am J Respir Crit Care Med》在线发表。

体外分离肺肿瘤B细胞产生的抗体

从63个原发性NSCLC（48例腺癌ADCA样本，15例鳞状细胞癌SCCA样本）和邻近肺肿瘤的正常组织（NAL）中分离CD45⁺白细胞，流氏细胞术分析结果表明，B细胞浸润是肿瘤发生的早期现象（图B）。

随后研究人员从10个NSCLC（7个ADCA、3个SCCA）和6个NAL样本中纯化出自身抗体，通过ELISA检测（图C）和免疫组化实验（图D）发现B细胞浸润局限于肿瘤边缘，而且B细胞越少的肿瘤IgG浓度越低（图E），IgM浓度与B细胞数量无明显关系（图F）。

图1. 肿瘤中B细胞数量和IgG浓度高于正常组织

（A）流式细胞术鉴定CD45⁺白细胞中CD19⁺B细胞含量；（B）流式细胞术分析NSCLC不同阶段CD19+B细胞含量；（C）ELISA检测B细胞提取物中IgG和IgM；（D）免疫组化CD20染色；（E）NSCLC的IgG与B细胞数量的相关性；（F）NSCLC的IgM与B细胞数量的相关性

HuProt蛋白芯片筛选肿瘤来源的恶性结节候选自身抗体

    为了确定IgG和IgM自身抗体的抗原靶点，研究人员将肿瘤B细胞提取物与HuProt蛋白芯片进行孵育，BCE中的自身抗体与目标蛋白进行结合，结果显示BCE中存在免疫球蛋白Kappa J区重组信号结合蛋白（RBPJ）的IgG自身抗体和谷氨酸-氨连接酶（GLUL）的IgM自身抗体，而且大多数的BCE中有明显的IgG自身抗体。

    研究人员对肿瘤BCE同一受试者的血浆进行分析，在肿瘤BCE和相应的恶性结节血浆（MN）中分别检测到105个和305个自身抗体， 8/10的受试者肿瘤BCE中出现的自身抗体约40%存在相应的MN中。在45种BCE和MN中常见的共同抗体中，40个为IgG型、4个为IgM型（BRAT1、GLUL、TMEM39B、EBP41L3）和一个同时具有IgG和IgM自身抗体的抗原FBXO2。此外研究还表明，血浆中发现的针对恶性结节的肺肿瘤相关自身抗体也是特异性的。  

图2.自身抗体靶点可在大多数肺肿瘤和血浆中被识别

（A）BCE肿瘤中自身抗体靶点筛选；（B）肿瘤BCE和相应MN血浆中抗体数量检测；（C）HuProt蛋白芯片检测的肿瘤BCE中自身抗体在血浆中也存在。

大样本验证候选标志物

抗体可游离存在也可以和抗原结合存在，而在HuProt蛋白芯片中，与抗原结合的抗体可能会被忽视。研究人员使用抗体芯片（针对13种抗原的抗体），检测肿瘤来源的自身抗体是否与血浆中的抗原结合，结果表明大多数肿瘤来源的自身抗体在血浆中既有游离形式也有与抗原结合形式存在。

随后进行了250个来自LCEDPC血浆样本的验证实验，利用前期筛选的候选物定制蛋白芯片，并使用含有前13种自身抗体靶点的靶向抗体芯片，找到5个在癌症中含量升高的靶点，即4个IgG型（EPB41L3、ANKRD36B、FGCR2A、LINGO1）和1个IgM型（S100A7L2）。使用logistic回归分析最大限度的预测AUC，发现EPB41L3、FGCR2A、LINGO1和S100A7L2联合检测的灵敏度未33.3%，特异度为90%。

图3. 血浆中验证肿瘤源性自身抗体可检测恶性结节

（A）NSCLC患者血浆中自身抗体高于良性结节患者；（B）NSCLC样本中4种自身抗体组合的ROC曲线。

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小结：

此项研究确定了肿瘤来源自身抗体的抗原靶点，并且证明其在恶性结节患者的血浆中也存在。大样本验证中发现EPB41L3、FGCR2A、LINGO1和S100A7L2联合使用时可准确检测恶性结节，但是这些自身抗体的临床效应还需进一步研究。

参考文献：

Lastwika KJ, et al., Tumor-Derived Autoantibodies Identify Malignant Pulmonary Nodules. [J], Am J Respir Crit Care Med 2018,201804-0628OC.          肿瘤血清标志物筛选研究路线：       博翀生物可提供HuProt人蛋白芯片的专业技术服务以及大样本验证中的定制蛋白芯片服务。